越来越多的证据表明，储存对细胞外囊泡(EV)的特性有影响。虽然-80°C储存是一种广泛使用的方法，但一些作者提出了改进的储存策略，但结果相互矛盾。近日发表在JEV杂志上的一篇报道设计了一项系统研究来系统评估-80°C储存和冻融循环对EVs的影响。研究测试了8种存储策略之间的差异，发现-80°C储存会以时间依赖性方式降低EV浓度和纯度，增加了颗粒尺寸和尺寸可变性，改变了zeta电位，并且发现在储存过程中发生了融合现象。
尽管在所有医学和生物领域都对细胞外囊泡(EVs)产生了极大的兴趣和越来越多的研究，但EVs的分离、表征和储存方面的挑战仍然存在，并且仍然严重缺乏标准程序。
关于样品的保存，越来越多的证据表明储存对EVs浓度、物理特性和功能的影响。新鲜分离的EV的储存和从先前储存的生物样品中回收EV似乎都会影响颗粒的性质。2013年，国际细胞外囊泡协会(ISEV)建议将样品保存在-80°C，进一步规定将EV储存在硅化容器中的磷酸盐缓冲液(PBS)中。然而，在ISEV指南的2018年更新中，不再提供生物样本或EV存储的标准。这些指南认识到保存对EV及其基质的影响，建议清楚地描述精确的存储策略并促进进一步调查以更好地阐明存储和恢复的效果。
在过去的几年里，很少有研究关注存储对EVs的影响。这些研究表明，存储方法会影响EVs的数量、物理特性和功能。一些作者建议使用冷冻保护剂(CPA)，例如海藻糖或二甲基亚砜(DMSO)，并取得了不错的结果。一些研究建议使用冻干，而其他研究则侧重于不同温度的影响或冷冻/解冻循环的速度。尽管发现令人鼓舞，但一些结果是相互矛盾的，并且同时比较不同存储策略的系统研究仍然缺乏。此外，这些研究中的大多数在相对较短的时间段（例如，几小时、几天、很少几周）后分析了样本，而那些在较长保存期后分析样本的研究大多解决了生物流体样本的储存，而不是分离的EV。
鉴于缺乏标准程序，建议使用新鲜样品并在收集生物体液并将其分离后立即分析EV。然而，存储可以允许同时分析来自不同来源或患者的样本。它还可以允许处理以前的生物样本库。
在此背景下，该研究旨在系统地表征和比较EVs种群，同时考虑不同的保存策略和时间点，将它们与新鲜样品进行比较，并研究储存过程中颗粒发生的现象。通过更多地阐明存储对EVs的影响，旨在为减少该研究领域的分析前可变性做出贡献。
-80°C储存对EV浓度、大小和污染物蛋白质浓度的影响。储存以时间依赖性方式降低EV产量(a)和EV从血浆样品中回收(e)。在(b)和(f)中，在储存的新鲜EV样品(b)和血浆储存后回收的EV(f)中，污染物蛋白质浓度均显示出随时间增加的趋势。EVs存储导致中值粒径(c)和尺寸变异性(d)显著增加。相反，血浆样品的储存对储存后回收的EV的尺寸（g）和粒径变异性（h）没有显著影响。
该研究设计了一项系统研究来评估-80°C储存和冻融循环对EVs的影响。研究测试了八种存储策略之间的差异，并调查了存储过程中可能发生的融合现象。分别通过尺寸排阻色谱法和超速离心法从人血浆和小鼠小胶质细胞培养物中收集EV。分析包括：浓度、大小和zeta电位（可调电阻脉冲传感）、污染物蛋白质评估；流式细胞仪分析两个单个荧光标记的EV群体（GFP和mCherry），在保存前混合。研究发现-80°C储存会以时间依赖性方式降低EV浓度和样品纯度。此外，它增加了颗粒尺寸和尺寸可变性，并改变了EVs的zeta电位，EVs在尺寸-电荷图中发生了变化。没有任何测试条件阻止观察到的效果。冻融循环会导致第一次循环后EV减少，并导致颗粒大小随循环而增加。使用流式细胞仪，在储存后，观察到大量双阳性EV(GFP+-mCherry+)。这一观察结果可能表明在储存过程中发生了融合现象。研究结果表明，在颗粒损失、纯度降低和导致颗粒的融合现象方面，存储对EV样品有显著影响。根据下游分析和实验设置，在大多数情况下，EV可能应该从新鲜的、非存档的样本中处理。
-80°C存储对电荷与尺寸图的影响
不同存储策略对EVs样本的影响。无论测试的存储策略如何，都观察到EVs产量随时间显著降低
存储导致EV破损和融合现象
相关资料：https://www.exosomemed.com/8190.html
综上，建议现提现用。
参考文献：
GelibterS, Marostica G, Mandelli A, Siciliani S, Podini P, Finardi A, Furlan R. Theimpact of storage on extracellular vesicles: A systematic study. J ExtracellVesicles. 2022 Feb;11(2):e12162. doi: 10.1002/jev2.12162. PMID: 35102719;PMCID: PMC8804350.
外泌体资讯网 JEV：负80度保存EVs/外泌体会有什么影响？
