细胞外囊泡 (EVs) 在许多生理和病理生理过程中发挥着关键作用，具有治疗和诊断用途的巨大潜力。尽管取得了重大进展，但 EV 存储稳定性的关键问题仍未得到解决和研究。来自瑞典卡罗林斯卡学院的研究人员在 J Extracell Vesicles杂志上发表文章，探讨了能使EV稳定储存的条件，并全面比较不同温度下各种储存缓冲液配方对来自不同细胞来源的EV的影响。研究认为，常规的一些缓冲体系在存储和处理 EV 中存在缺陷，并确定PBS-HAT为合适的EV存储缓冲液。
在过去的十年中，细胞外囊泡 (EVs) 的各个方面已经得到了许多研究，这些研究涉及EV的基本生物学、EV在各种生理和病理生理过程中的作用，以及EV在治疗和诊断方面的临床应用潜力。尽管不断努力并取得进展，EV分离和表征相关的数据报告和程序的标准化越来越规范，但仍然存在许多悬而未决的问题和挑战。特别是我们对储存条件对 EV 的影响的了解仍然很少，并且该领域缺乏明确和标准化的 EV 保存条件，因为EV储存稳定性是生物库临床样本稳定性和生产一致性的关键问题，也是EV用于治疗用途的先决条件。
迄今为止，许多研究都探讨了储存条件对EV的影响，表明储存条件相关因素可能会影响EV的各种特性，包括生物物理稳定性、颗粒回收率和直径以及EV的功能。到目前为止，磷酸盐缓冲液 (PBS) 一直是大多数研究中首选的储存缓冲液，并且结论性建议是在 -80°C 下储存和等分EV试样。过去几年的一些研究调查了储存温度和时间的影响，重点关注用于分离或储存的塑料管的作用，或探索使用 DMSO 或海藻糖等防冻添加剂。最近的一些综合研究调查了冻干背景下的 EV 稳定性、囊泡融合导致的与储存相关的颗粒损失，以及储存条件和浓缩方法对 EV 恢复和功能的短期影响。一般来说，报告的结果有时是相互矛盾的，可能研究人员关注的是特定生物流体样品的存储方法、EV分离方面的特定存储策略、或仅涵盖EV的部分方面，例如几项研究中的小RNA定量或大蛋白质含量。这一点尤其重要，因为众所周知，EV 的来源和分离方法的选择会影响 EV 的组成、回收率和纯度。迄今为止，关于储存条件对 EV 的影响仍缺乏共识，需要进行更全面的研究，系统地比较较长时间范围内的不同储存策略，以确定稳定细胞外囊泡制剂的储存条件，特别是对于来自细胞培养上清液纯化的 EV 样品。
为了确定EV长期储存的条件，研究人员在这篇文章中分享了一个详细的数据集，总结了他们实验室为进一步了解EV的稳定性所做的工作。研究人员通过不同分离方法从不同细胞来源的细胞培养上清液中分离 EV，并建立了一项研究，评估长达 2 年的不同EV的保存策略。在将 EV 样品储存在不同缓冲液和不同温度下后，通过各种方法对样品进行分析，包括纳米粒子追踪分析 (NTA)、基于磁珠的多重流式细胞术和单囊泡成像流式细胞术 (IFCM)。此外，采用不同的 EV 工程策略引入特定的修饰来评估进一步的参数，例如细胞摄取、配体结合和囊泡内蛋白的荧光稳定性。
研究结果表明，随着时间的推移，EV存储在PBS中会导致回收率大大降低，在所有测试温度下的纯EV样本，几天内就开始了降解。进一步报告发现，使用PBS作为稀释剂会在几分钟内导致EV回收率严重降低。几种测试的新缓冲条件在很大程度上能够阻止了观察到的效果，最为推荐的缓冲体系是补充了人白蛋白和海藻糖的PBS溶液 (PBS-HAT) 。研究报告说，PBS-HAT缓冲液有助于明显改善在-80°C下储存的样品的短期和长期EV保存，在多个冻融循环中保持稳定性，并在后续稀释EV样品时显著提高EV的回收率。这些结果有助于确定用于EV保存和处理的缓冲体系，并提高我们对存储条件如何影响EV质量和恢复的理解。
参考文献：Identification of storage conditions stabilizing extracellular vesicles preparations. J Extracell Vesicles. 2022 Jun;11(6):e12238.
外泌体资讯网 JEV丨外泌体适合在PBS缓冲液中长期储存吗？
