本周hzangs在最新文献中选取了10篇分享给大家，第1篇文章介绍了不同病毒灭活方法对细胞外囊泡物理化学性质的影响；第2篇文章介绍了特定药物对肿瘤细胞释放带有PD-L1的外泌体的影响；第3篇文章综述了目前具有临床应用潜力的细胞外囊泡分离和检测策略；第7篇文章介绍了一种一步法分析外泌体miRNA的策略；第10篇文章介绍了血清外泌体在哮喘诊断中的标志物作用。
1.Comparison of viral inactivation methods on the characteristics of extracellular vesicles from SARS-CoV-2 infected human lung epithelial cells.
病毒灭活方法对SARS-CoV-2感染人肺上皮细胞胞外囊泡特征的比较。
[J Extracell Vesicles] PMID: 36468940
摘要：SARS-CoV-2 感染与细胞外囊泡 (EV) 的相互作用目前特别令人感兴趣。在位于生物安全 3 级 (BSL-3) 环境之外的仪器中研究 SARS-CoV-2 污染的 EV 分离株需要了解病毒灭活方法如何影响细胞外囊泡 (EV) 的结构和功能。因此，三种常见的病毒灭活方法，即紫外线-C（UVC；1350 mJ/cm 2 ）、β-丙内酯（BPL；0.005%）、加热（56°C，45分钟）对确定的 EV 颗粒及其蛋白质进行、RNA 和功能。通过逐步离心、超滤和排阻色谱法，从感染 SARS-CoV-2 的人肺上皮 Calu-3 细胞的上清液中分离出小型 EV。EV分离株含有 SARS-CoV-2。 UVC、BPL 和热量完全消除了受污染 EV 的 SARS-CoV-2 传染性。与热处理相比，通过电子显微镜和纳米粒子追踪进行粒子检测 EV 受 UVC 和 BPL 的影响较小。 EV 标记的蛋白质印迹分析不受这三种方法中任何一种的影响。 UVC 通过定量 RT-PCR 降低了 SARS-CoV-2 尖峰检测能力，并略微改变了 EV 衍生的β-肌动蛋白检测。 SARS-CoV-2 污染的 EV 分离株的成纤维细胞迁移伤口愈合活性仅在 UVC 处理后保留。总之，特定的病毒灭活方法与 SARS-CoV-2 污染的 EV 分离株的特定措施兼容。 UVC 处理似乎更适合研究从 SARS-CoV-2 感染细胞释放的 EV 的功能。
2.Manipulation of PD-L1 Endosomal Trafficking Promotes Anticancer Immunity.
操纵 PD-L1 内体运输促进抗癌免疫。
[Adv Sci (Weinh)] PMID: 36567273
摘要：PD-L1 在肿瘤细胞中的异常调节仍然知之甚少。在这里，作者系统地研究了质膜 PD-L1 在肿瘤细胞中的内体运输。他们表明质膜 PD-L1 不断内化，然后从早期内体运输到多泡体/晚期内体，循环内体，溶酶体和/或细胞外囊泡 (EV)。 PD-L1 的这种组成型内吞运输依赖于 Rab5 和网格蛋白。三嗪化合物 6J1 可阻断 PD-L1 的内体运输，并通过激活 Rab5 诱导其在内吞小泡中积累。 6J1 还通过激活 Rab27 促进外泌体 PD-L1 分泌。这些作用共同导致 6J1 处理的肿瘤细胞中 PD-L1 的膜水平降低，并使肿瘤细胞在体外更容易受到 T 细胞的肿瘤杀伤活性的影响。 6J1 还增加肿瘤浸润性细胞毒性 T 细胞并促进肿瘤微环境中的趋化因子分泌。 Rab27 敲低消除了 EV 中 6J1 诱导的 PD-L1 分泌，并了恢复了肿瘤中耗尽的肿瘤浸润 T 细胞，从而提高了 6J1 的抗癌功效。此外，6J1 和抗 PD-1 抗体的组合显着改善了抗癌免疫反应。因此，除了免疫检查点阻断抗体治疗外，操纵 PD-L1 内体运输提供了一种有前途的方法来促进抗癌免疫反应。
3.Status quo of Extracellular Vesicle isolation and detection methods for clinical utility.
用于临床的细胞外囊泡分离和检测方法的现状。
[Semin Cancer Biol] PMID: 36581020
摘要：细胞外囊泡 (EV) 是纳米级颗粒，在临床领域具有巨大潜力，因为它们的生物分子特征是用于癌症诊断和预后的非侵入性液体活检的关键。 EVs 存在于大多数体液中，因此很容易从患者身上获得，优于传统的侵入性组织活检和成像技术。然而，有一些限制因素阻碍了 EV 的临床使用。 EV 生物标志物从“实验台到床边”的转化受到目前在实验室中实施的 EV 分离和随后的生物标志物检测方法的阻碍。尽管目前的纯化和检测方法是有效的，但它们缺乏实用性，因为它们需要高体液量、设备可用性低、周转时间慢和成本高。对克服这些限制的技术的高需求导致了纳米技术设备的重大进步。这些设备旨在将 EV 分离和生物标志物检测集成到从体液中直接检测 EV 的一步法中。这为 EV 加速进入当前临床标准提供了希望。这篇综述强调了 EV 作为癌症生物标志物的重要性、临床研究目前面临的方法学障碍以及新型纳米设备如何促进临床转化。
4.Extracellular vesicles in the glioblastoma microenvironment: A diagnostic and therapeutic perspective.
胶质母细胞瘤微环境中的细胞外囊泡：诊断和治疗观点。
[Mol Aspects Med] PMID: 36577547
摘要：胶质母细胞瘤 (GBM) 是最恶性的胶质瘤形式，也是成人中最常见和致命的原发性脑肿瘤。传统的癌症治疗对 GBM 无效。 GBM 细胞响应并适应周围称为肿瘤微环境 (TME) 的脑实质，以促进肿瘤保存。在特定的 TME 中，GBM 生物学对 3 个特别感兴趣：血管周围生态位、脑室下区神经源性生态位和免疫微环境。 GBM 细胞和 TME 细胞呈现相互反馈，导致肿瘤维持。这些细胞可以交流的一种方式是通过细胞外囊泡。这些囊泡包括外泌体和微泡，它们能够携带癌性和非癌性物质，例如 miRNA、RNA、蛋白质、脂质和 DNA。在这篇综述中，我们将讨论细胞外囊泡这个蓬勃发展的话题，以及它们如何成为 GBM 的诊断和靶向载体的新颖性。
5.Exosomes as biomarkers and therapeutic delivery for autoimmune diseases: Opportunities and challenges.
外泌体作为自身免疫性疾病的生物标志物和治疗药物：机遇与挑战。
[Autoimmun Rev] PMID: 36565798
摘要：外泌体是由脂质、蛋白质和核酸组成的球形脂质双层囊泡，通过囊泡转运系统传递信号分子，调节靶细胞的功能和形态，从而参与多种生物学过程，如细胞凋亡或增殖，以及细胞因子的产生。在过去的几十年中，越来越多的证据表明外泌体在多种自身免疫性疾病（AD）的病理机制中发挥着关键作用，包括类风湿性关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）、1型糖尿病（T1DM）、干燥综合征(SS)、多发性硬化症 (MS)、炎症性肠病 (IBD)。系统性硬化症 (SSc) 等。一些出版物表明，外泌体主要通过细胞间通讯和影响免疫细胞的反应参与 AD 的发病机制。外泌体的水平和核酸的表达量可以反映疾病的进展程度，是AD优秀的生物标志物。此外，由于外泌体的生物相容性和稳定性，它有可能用作药物载体。在这篇综述中，我们简要总结了目前关于外泌体在 ADs 中的生物学功能的研究，并提供了外泌体作为这些疾病的生物标志物和治疗递送的潜力的见解。
6.Extracellular vesicle microRNAs contribute to Notch signaling pathway in T-cell acute lymphoblastic leukemia.
细胞外囊泡 microRNA 促进 T 细胞急性淋巴细胞白血病中的 Notch 信号通路激活。
[Mol Cancer] PMID: 36550553
摘要：T细胞急性淋巴细胞白血病 (T-ALL) 是一种侵袭性 T 细胞恶性肿瘤，其特征是基因型定义和表型不同的细胞群。克隆扩增与遗传和表观遗传事件以及影响亚克隆层次结构和支持白血病亚群动态的外部刺激调节有关。最近，外泌体等小细胞外囊泡 (sEV) 也被证明在白血病中发挥作用。在这里，通过结合 miRNome、大量和单细胞转录组分析，我们发现 T-ALL 分泌的 sEV 含有 NOTCH1 依赖性 microRNAs (EV-miRs)，它控制着作为自分泌刺激物的致癌途径，并最终促进高度分化的扩增/存活。有趣的是，我们发现依赖 NOTCH1 的 EV-miRs 主要由 miR-17-92a 簇和旁系同源物的成员组成，这在体外挽救了被 γ-分泌酶抑制剂 (GSI) 阻断的 T-ALL 细胞的增殖，并调节了一个网络表征复发/难治性早期 T 细胞祖细胞 (ETP) ALL 患者的基因。所有这些发现表明，NOTCH1 依赖性 EV-miR 可能维持免疫表型定义的细胞群的生长/存活，从而改变细胞异质性和 T 细胞白血病的动力学以响应常规疗法。
7.An in situ exosomal miRNA sensing biochip based on multi-branched localized catalytic hairpin assembly and photonic crystals.
基于多分支局部催化发夹组装和光子晶体的原位外泌体 miRNA 传感生物芯片。
[Biosens Bioelectron] PMID: 36529054
摘要：外泌体 microRNA (miRNA) 正在成为有吸引力的非侵入性和可靠的疾病诊断生物标志物。原位外泌体miRNA检测可避免费时费力的外泌体裂解、RNA提取，有效提高准确性。然而，原位外泌体 miRNA 检测受到目标丰度低和探针低渗透性的阻碍。在此，提出了一种基于多分支局部催化发夹组装 (MLCHA) 和光子晶体 (PC) 的原位外泌体 miRNA 传感生物芯片。 MLCHA 探针由于其刚性可以非破坏性地渗透到外泌体中，并在识别目标 miRNA 时产生放大的荧光信号。然后，PC 进一步增强荧光信号以提高灵敏度。所开发的生物传感器不仅可以浓度依赖性方式检测外泌体 miRNA，还可以区分样本的癌症状态和健康状态，这在非侵入性临床诊断中具有潜力。
8.Identifying the Phenotypes of Tumor-Derived Extracellular Vesicles Using Size-Coded Affinity Microbeads.
使用尺寸编码的亲和微珠鉴定肿瘤来源的细胞外囊泡的表型。
[J Am Chem Soc] PMID: 36527408
摘要：肿瘤来源的细胞外囊泡（tEV）生物标志物可以反映癌细胞表型，在癌症诊断和治疗方面具有巨大潜力。然而，tEV 显示出高度异质性，并且由于其低表达，EV 生物标志物的快速和灵敏识别仍然具有挑战性。光谱重叠还显着限制了荧光探针对 EV 生物标志物的多重分析。在此，我们开发了一种用于高度敏感的 tEV 表型分析的方法，该方法使用大小编码的微珠，这些微珠携带发夹探针，可以结合针对不同 tEV 生物标志物的适体。我们还设计了一种包含间隔阵列的微流控芯片，该阵列根据微珠的大小将这些微珠隔离在不同的芯片区域，以生成指示不同 EV 生物标志物水平的特定位置信号。这些微珠上的 EV 生物标志物信号通过原位滚动循环扩增 (RCA) 进行了放大。该策略允许通过荧光光谱同时检测多个 tEV 表型，而不受光谱重叠的限制。本研究表明，这种 tEV 表型分析方法可以快速、同时检测六种不同的 tEV 表型，灵敏度高。由于传感平台的可编程性，该方法可以快速适应检测到的不同生物标志物的 tEV。值得注意的是，临床队列研究表明，该策略可能为癌症患者的精准诊断和个性化治疗提供新思路。
9.Electrochemical biosensors in exosome analysis; a short journey to the present and future trends in early-stage evaluation of cancers.
外泌体分析中的电化学生物传感器；癌症早期评估的当前和未来趋势。
[Biosens Bioelectron] PMID: 36521207
摘要：肿瘤微环境由特定实质内的多种细胞组成，例如癌细胞、成纤维细胞、内皮细胞和免疫细胞。已经表明，癌细胞可以通过释放纳米级细胞外囊泡即外泌体 (Exo)，以旁分泌方式对肿瘤生态位内的其他细胞进行驯化，从而加速肿瘤质量生长。这表明具有显着信息的外泌体货物可以反映亲本肿瘤细胞中代谢和蛋白质组学特征的任何变化。因此，外泌体可以被吹捧为具有不同肿瘤类型患者的特定生物标志物的预后、诊断和治疗元素。尽管有这些优点，但传统的外泌体分离和纯化方案费时费力，异常形态和纯度低。在过去的几十年中，基于生物传感器的模式作为新兴仪器，已被用于检测和分析生物流体中的 Exo。由于适当的特异性、灵敏度和实时读出，生物传感器成为在体外和体内环境中分析 Exo 的有前途的方法。还讨论了电化学生物传感器在基于外泌体货物和概况确定肿瘤分级方面的固有优势和优越性。还讨论了与电化学生物传感器在临床环境中的应用相关的当前和未来的挑战。
10.Serum exosome inflamma-miRs are surrogate biomarkers for asthma phenotype and severity.
血清外泌体炎症 miR 是哮喘表型和严重程度的替代生物标志物。
[Allergy] PMID: 35971848
摘要：哮喘是一种具有多种表型和严重程度的异质性疾病，其中涉及不同的 T 细胞亚群。这些细胞表达特定的 miRNA（即炎症 miR），这些 miRNA 可以在激活后通过外泌体释放到血清中，并用作潜在炎症的生物标志物。因此，我们旨在评估来自不同哮喘患者亚组的血清外泌体中的特定 T 细胞 miRNA 特征。来自健康供体 (N=30) 和患者 (N=119) 的样本具有不同的哮喘型（T2 高-特应性/T2 高-非特应性/T2 低）和严重程度（轻度/MA 和中度-严重/MSA），并收集了人口统计学、临床、血液学和生化特征。预选了先前与不同 Th 亚群相关的 12 种 miRNA，并使用 RT-qPCR 测量了它们在血清外泌体样本中的水平。我们检测到五个对血清外泌体具有高置信度的 miRNA：miR-16-5p、miR-21-5p、miR-126-3p、miR146a-5p 和 miR-215-5p。与 MA 相比，除 miR-16-5p 外，所有这些在 MSA 患者中均上调。创建了包括这些 miRNA 的逻辑回归模型来区分这两种情况，呈现 0.896 (0.830-0.961) 的 ROC 曲线 AUC。 miR-21-5p 和 miR-126-3p 均参与 Th1/Th2 分化，在 T2 高特应性患者中特别增强。值得注意的是，所有这些变化都是在秋季采集的样本中发现的。相反，IL-6 高的 MSA 患者，更肥胖、更年长、中性粒细胞和嗜碱性粒细胞计数以及 TNF 水平更高，显示出 miR-21-5p、miR-126-3p 和 miR-146a-5p 的减少。免疫相关的 miRNA，包括 miR-21-5p、miR-126-3p、miR-146a-5p 和 miR-215-5p，可用作临床相关的表型和哮喘严重程度的非侵入性生物标志物。
今天的整理就到这里。希望大家可以有所收获。大家下周见！
