外泌体之家 讯/ 河北科技大学韩春雨教授在几个月前发表了关于NgAgo作为基因编辑工具的论文，由于其潜在的应用价值巨大，被国内一些媒体称为“诺奖级”成果。但随着时间的推移，越来越多的研究者宣称不能重复出韩教授论文中的结果，同时韩教授也指出可能是由于污染等原因造成的无法重复，并拒绝公布原始数据。这一争议，逐渐使这一研究成果称为争议性很大结果。
11月11日，Cell Research在线发表了南通大学刘东教授研究组的最新研究成果，刘东教授的研究团队将NgAgo-gDNA系统注射进入斑马鱼受精卵，观察其对斑马鱼基因的影响。发现，NgAgo-gDNA系统会抑制靶基因的表达，并改变靶基因对应的表型，但并未发现基因组编辑现象。
刘东教授团队利用NgAgo-gDNA系统分别试验了斑马鱼的多个基因，均会改变对应基因的在斑马鱼中的表型，同时检测到对应基因mRNA丰度的降低，但测序几十个克隆，均为见基因编辑现象；将NgAgo-gDNA系统在斑马鱼中的试验温度调整到37℃依旧得到类似结果，但未见基因编辑现象；突变掉NgAgo（预测）的活性位点后重复实验依旧可以改变对应基因在斑马鱼中的表型，同样检测到mRNA丰度的降低。使用CRISPR/Cas9系统针对相同的基因进行试验，可以敲除掉对应基因并得到对应的表型变化；使用活性位点突变的dCas9-gRNA系统可以得到对应基因表型变化，及mRNA水平的降低。由这些数据刘东教授团队得出结论，NgAgo-gDNA系统在斑马鱼中会对靶基因的表达起到敲低效果，该作用可能是由于NgAgo-gDNA结合到对应靶基因造成基因表达抑制，但未见基因编辑现象（原文：our study shows that gene knockdown is the mainmechanism by which gDNA/NgAgo affects gene function in zebrafish. This issupported by results of the experiments using presumably catalytically dead NgAgo.In addition, we have failed to detect any mutation in all the embryos weexamined. Since the catalytically inactive (dead) Cas9 (dCas9):sgRNA complex couldefficiently inhibit gene expression through binding to the coding sequence[16], we hypothesize that gDNA/ NgAgo may bind to a target gene to block itstranscription. Overall, we suggest that the gDNA/NgAgo system provides analternative strategy for gene knockdown. 如有翻译不妥之处，还请多多指正）。
刘东教授团队首先设计了针对斑马鱼Fabp11a基因3’和5’区域正链及负链的gDNA（如上图所示），之后将不同组合的NgAgo+gDNA 注射进入斑马鱼胚胎，统计斑马鱼的发育畸形比例并于control做对比。
结果显示，只有加入NgAgo-gDNA系统的斑马鱼胚胎出现了发育畸形现象，同时对用的靶基因Fabp11a的mRNA水平有明显下降。
笔者按：NgAgo系统是否可以发挥基因编辑功能是目前的争论热点。刘东教授团队证明了NgAgo-gDNA系统对靶基因表达具有影响，同时猜测NgAgo-gDNA可能会结合到靶基因抑制基因表达，刘东教授团队未检测到在斑马鱼中基因编辑现象的原因还不清楚，可能是实验原因造成了NgAgo的DNA内切酶活性出现问题。dCas9-gRNA系统同样可以得到与NgAgo-gDNA系统相似的表型，也暗示着NgAgo可能具有DNA结合活性。相信随着时间的推移，会有更多的报道来揭示NgAgo的秘密。让我们平心静气，给所有的研究者多一点时间，相信“真理越辩越明！”
（图）文章通讯作者：南通大学神经再生重点实验室刘东教授
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