经放射疗法的前列腺癌（PCa）患者的体内循环外泌体是用于监测治疗反应的有吸引力的候选生物标志物。用于生物流体中的外泌体的分离和内容表征的流程目前已经有很多方法可以进行。在这项研究中，研究人员报告了一种方案，用于分离和表征外泌体miRNA含量并评估放疗诱导的变化。
在这项初步研究中，伯尔尼大学的研究人员对从放射治疗（RT）和对照组治疗的中高风险疾病的PCa患者中获得的25份血清样本进行了靶向外泌体miRNA分析。在放射治疗后至少28天收集治疗后血液样品作为配对的随访样品。完整的工作流程包括两个阶段：I）过滤和聚乙二醇沉淀阶段，富集尺寸小于200nm的颗粒，然后使用电子显微镜表征；II）流式细胞术。最后，使用RNA提取试剂盒和qRT-PCR进行未处理和处理的患者样品之间的miRNA表达分析。
在初步数据中，与对照组（6.07E + 08）相比，来自PCa患者的1ml血清显示出更高的外泌体浓度（3.68E + 10）。与未处理的样品相比，发现放疗后外泌体的总体水平更高，中位值从3.68E + 10增加到为5.40E + 10，p值= 0.52。利用电子显微镜，研究人员能够观察到形状和大小与外泌体相近的杯状囊泡。基于beads的流式细胞术显示外外泌体上四次跨膜蛋白表面标志物CD63和CD9的阳性。研究人员已经在外泌体中鉴定了所有五种miRNA（hsa-let-7a-5p，hsa-miR-141-3p，hsa-miR-145-5p，hsa-miR-21-5p，hsa-miR-99b-5p）。放疗后hsa-let-7a-5p表达发生总体均发生变化，但仅在高风险组中差异显着（p = 0.037）。此外，与中间组相比，高风险组对hsa-miR-21-5p的放疗反应升高（p = 0.036）。
外周血miRNA的分析及其在放射治疗后的差异表达提示了寻找生物标志物潜力，但是仍需要在较大的患者群组中进一步研究。
图：表征血清来源的外泌体。 a，b外泌体的透射电子显微镜图像，尺寸小于200nm的杯形囊泡; c western blot显示患者中CD63和CD81的表达。
参考文献：Malla B, Aebersold DM, Dal Pra A. (2018) Protocol for serum exosomal miRNAs analysis in prostate cancer patients treated with radiotherapy. J Transl Med 16(1):223.
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