本周hzangs在最新文献中选取了9篇分享给大家，第1篇文章发表在JEV上，介绍了一种人工合成的细胞外囊泡模拟物，这种模拟物可以用来作为标准品，挺有意思的，期待它的商业化；第2篇文章介绍了在阿尔兹海默症患者循环系统中发现的一种特殊的囊泡亚群，这种囊泡亚群具有Aβ的聚集，这种Aβ阳性的循环细胞外囊泡与病人的病程进展有一定的相关性；第4篇文章介绍了一种单细胞来源的细胞外囊泡分析策略；第9篇文章介绍了植物来源细胞外囊泡参与病原体免疫，以及病原体进化出免疫逃逸机制的报道。JEV杂志最近文章有点多，建议大家可以关注一下，虽然文章新意不足，但是JEV作为囊泡领域的专刊，对囊泡研究相关实验技术的要求还是很高的，里面的文章具有一定的参考价值。相关文章的原文在周一前会发布到论坛同名贴下，需要的可以到论坛下载
- Tetraspanin-decorated extracellular vesicle-mimetics as a novel adaptable reference material. Tetraspanin装饰的细胞外囊泡模拟物作为新的适应性参考材料。[J Extracell Vesicles] PMID：30863514
摘要：诸如小尺寸，低折射率和多分散性的特征对目前可用的细胞外囊泡（EV）检测方法提出了挑战。此外，缺乏标准实验条件使得难以比较通过不同技术方法获得的分析结果。通过用富含EV的四跨膜蛋白的重组抗原区修饰合成纳米囊泡，我们旨在构建EV模拟物，其可用作EV分析的标准品。为此，用生物素连接酶BirA的靶序列标记四跨膜蛋白CD9，CD63和CD81的大细胞外环序列，并用BirA表达质粒共转化到大肠杆菌中。然后通过亲和层析分离GST融合蛋白，并使用凝血酶释放。然后将生物素化的重组四跨膜蛋白环偶联到（链霉）抗生物素蛋白包被的合成纳米囊泡上，并通过斑点印迹，Western印迹，纳米颗粒跟踪分析，流式细胞术和透射电子显微镜分析和表征。通过这种方法，我们能够有效地生产与天然EV具有相似生物物理特性的四跨膜结构域修饰的纳米囊泡，可以使用针对常见EV标记物（如四跨膜蛋白）的特异性抗体进行检测，并且可以用作检测技术评价参考材料。
PS：目前细胞外囊泡的研究存在诸多困难。不同方法分离的细胞外囊泡如何比较，不同仪器是否都适合于细胞外囊泡的分析，不同方法和仪器获得的研究数据是否具有可比性。这些问题一直困扰着囊泡领域的研究者，也给囊泡领域的研究带来了阻力。这篇文章介绍了使用人工方法合成细胞外囊泡的类似物。通过偶联一些特征蛋白来制作人造囊泡。这些人造囊泡具有与细胞释放的囊泡相似的物理化学性质，是未来细胞外囊泡研究标准化的重要参考。很有意思的一篇研究报道，感兴趣的可以读读，了解一下。
- Subtyping of circulating exosome-bound amyloid β reflects brain plaque deposition. 淀粉样蛋白β结合的循环外泌体亚群反映了脑斑块沉积。 [Nat Commun] IF=12.353 PMID：30850633
摘要：尽管人们对发展阿尔茨海默病(AD)的血液测量有着浓厚的兴趣，但由于灵敏度有限，且与脑病理学的相关性较差，这一进展一直不尽如人意。在这里,我们提供一个专门的分析平台,测量不同人群直接从血液蛋白质分离的和与外泌体结合的循环β淀粉样蛋白(Aβ)。该技术被称为扩增等离子体外泌体分析技术(APEX)，利用原位酶转化局部光学沉积物和双层等离子体纳米结构使其达到可以检测的水平。它显示出优越的敏感性(约200外泌体)，并能在外泌体中实现多种目标的共定位。使用这个平台,我们发现Aβ聚集率先与外泌体结合。我们因此定义了Aβ结合的exosomes亚群(Aβ42+ CD63+)并测量其丰度在A病人和对照者血液中的丰度。与游离或总循环Aβ相比，Aβ阳性外泌体测量可以更好地反映PET成像的大脑淀粉样斑块和区分各种临床组。
PS：β淀粉样蛋白积累是阿尔兹海默症的主要临床表现之一。简单快速的检测β淀粉样蛋白积累是目前一个比较难实现的设想。这篇文章发现聚集的β淀粉样蛋白具有结合循环外泌体的特性，并且证实通过检测Aβ阳性的循环外泌体水平可以反应患者的疾病进展。
- Proteomic analysis reveals procoagulant properties of cigarette smoke-induced extracellular vesicles. 蛋白质组学分析揭示了烟草烟雾诱导的细胞外囊泡的促凝血特性。 [J Extracell Vesicles] PMID：30863515
摘要：以气道上皮细胞在基础条件下和暴露于香烟烟雾提取物（CSE）时分泌细胞外囊泡（EV）为研究对象。我们对这些细胞外囊泡组成的深入了解将有助于揭示它们在体内稳态和吸烟引起的病理学中的功能。在这里，我们描绘了正常和CSE诱导的气道上皮EV的蛋白质组成。将BEAS-2B细胞未暴露或暴露于1％CSE中24小时，然后使用超滤和尺寸排阻色谱法进行EV分离。用串联质量标签标记分离的EV，并使用nano-LC-MS / MS测定其蛋白质组学组成。组织因子（TF）活性通过因子Xa生成测定，通过凝血酶原酶测定的磷脂酰丝氨酸（PS）含量和使用校准的自动血栓图（CAT）的凝血酶生成来确定。 Nano-LC-MS / MS鉴定出585种高可信度的EV相关蛋白。其中，根据适度的t检验，然后在FDR阈值设置为0.1的情况下进行错误发现率（FDR）调整后，在CSE-EV中差异表达的有201个。功能富集分析显示，CSE-EV（包括TF）中24种信号通路中的蛋白显着上调。通过基于微珠的流式细胞术证实CSE-EV上TF表达增加，并且与TF活性增加有关。与对照-EVs相比，CSE-EV在正常人血浆中引起更快和更多的凝血酶产生，。总之，蛋白质组学分析使我们能够预测体外证实的CSE-EV的促凝血特性。香烟烟雾诱发的EV可能导致吸烟者心血管和呼吸系统疾病患病风险的增加。
PS：烟草对使用者的危害是目前学界共识，但是烟草造成危害的具体机制还有待进一步阐明。JEV发表的最新文章报道了烟草烟雾提取物对气道上皮细胞释放的细胞外囊泡的蛋白质组的影响。组学研究发现烟草烟雾大范围的改变了细胞外囊泡的蛋白质组，这些改变的蛋白丰度与吸烟者的心血管和呼吸系统疾病风险呈现正相关。更多的内容请关注往期推文：JEV：蛋白质组学分析揭示香烟烟雾诱导细胞外囊泡的促凝血特性
- Multiplexed profiling of single-cell extracellular vesicles secretion. 单细胞细胞外囊泡分泌的多重分析。 [Proc Natl Acad Sci U S A] IF=9.504 PMID：30858327
摘要：细胞外囊泡（EV）是参与健康和疾病中重要过程的细胞间介质。用于EV表面标志物谱分析的常规方法基于群体测量，掩盖了细胞与细胞的异质性导致的EV分泌的数量和表型的差异。在此，通过使用空间模式化的抗体条形码，我们实现了同时对约1,000个单细胞进行单细胞释放的细胞外囊泡的多重分析。应用该平台描述了人口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系来源的细胞外囊泡，是我们对EV分泌在单细胞异质性有了深入理解。值得注意的是，我们观察到某些EV表型（例如，CD63 + EV）的减少与OSCC细胞系和原代OSCC细胞的侵入特征相关。我们还同时从同一单细胞中实现了EV分泌和细胞因子分泌的多重检测，以研究细胞通讯的多维图谱，我们通过可视化聚类和主成分分析从中解析了具有不同分泌谱的分层功能亚群。特别地，我们发现不同的细胞亚群主导了EV分泌和细胞因子分泌。这里介绍的技术可以在单细胞水平上综合评估EV分泌异质性，这可能成为促进当前单细胞分析和EV研究不可或缺的工具。
PS：目前由于技术限制，对单个细胞里来源的EV的分析难度。这篇文章尝试了通过抗体条码来区分体系中每一个细胞来源的EV，并取得了一定的成功。这一方法的开发有助于我们开展群体中单个细胞释放的EV的特异性研究，有助于我们了解一个体系中不同细胞来源的EV的异同。
- Design strategies and application progress of therapeutic exosomes.治疗性外泌体的设计策略及应用进展。 [Theranostics] IF=8.537 PMID：30867813
摘要：外泌体具有天然的物质转运特性、固有的长期循环能力和良好的生物相容性，适合于传递多种化学物质、蛋白质、核酸和基因治疗药物，在药物递送载体开发方面具有很大的潜力。然而，目前还没有一种有效的方法将特异性蛋白制剂加载到外泌体中，并使其被靶细胞吸收。外泌体的应用仍然有限。本文综述了将特定的处理分子(蛋白质、核酸和小化学物质)装入外泌体的方法、细胞和组织靶向的设计策略以及外泌体形成的因素。本综述可作为进一步研究和开发治疗性外泌体的参考。
PS:细胞外囊泡作为药物递送载体是近些年进展十分迅速的囊泡研究方向。Theranostics杂志上也发表了不少这方面相关的报道。这篇文章主要汇总了目前细胞外囊泡作为药物载体相关研究的进展以及目前依旧面临的困难。
- Immune Cell-Derived Extracellular Vesicles - Functions and Therapeutic Applications. 免疫细胞来源的细胞外囊泡 - 功能和治疗应用。 [Trends Mol Med] IF=11.021 PMID：30853173
摘要：细胞外囊泡（EV）是纳米大小的囊泡，具有转移核酸，蛋白质和脂质的能力，几乎所有的细胞都能够释放细胞外囊泡。 EV包括源自胞内体区室的外泌体，来自细胞膜的微泡和凋亡期间释放的凋亡小体。众多研究发现细胞外囊泡在健康和疾病中的作用，并可以作为潜在的生物标志物，新开发的FDA批准的检测方法进入市场。 目前，学术机构和工业企业正在开展临床试验，以将EV用于癌症，移植物抗宿主病和神经退行性疾病等疾病。 该综述描述和讨论了目前对免疫细胞衍生的外泌体和微泡的功能的理解，以及它们如何被探索用于免疫疗法。
PS：综述文章，介绍了目前免疫细胞相关的细胞外囊泡研究。
- Exosome-derived miR-339-5p mediates radiosensitivity by targeting Cdc25A in locally advanced esophageal squamous cell carcinoma. 外泌体携带的miR-339-5p通过靶向局部晚期食管鳞状细胞癌中的Cdc25A介导放射敏感性。 [Oncogene] IF=6.854 PMID：30858545
摘要：与放射抗性相关的癌细胞可能引起局部复发和远处转移复发。然而，尚不清楚特定的miRNA是否在放射抗性和/或预后中具有直接作用。在这项研究中，我们发现miR-339-5p促进放射敏感性，并在食管癌细胞的放射抗性亚群中下调。值得注意的是，miR-339-5p通过外泌体选择性地分泌到血液中，并且较高的血清miR-339-5p水平与放射治疗敏感性和良好的存活率呈正相关。此外，与食管鳞状细胞癌（ESCC）患者的T1 / T2期相比，T3 / T4期miR-339-5p表达下调（P = 0.04），组织中低miR-339-5p表达与总生存率低（P = 0.036）和无病生存率（P = 0.037）显着相关。 miR-339-5p的过表达增强了体外和体内的放射敏感性。机制方面，miR-339-5p通过靶向Cdc25A增强放射敏感性，并且由Runx3转录调节。在组织样品中观察到miR-339-5p水平与Cdc25A / Runx3水平之间的相关性。有趣的是，miR-339-5p表达与Runx3的组合分析相较单一基因分析更优越（P = 0.009）。总体而言，外泌体衍生的miR-339-5p通过下调Cdc25A介导放射敏感性，并可以用于预测局部晚期ESCC术前放疗的病理反应，表明它可能是一种有前途的非侵入性生物标志物，可促进个性化治疗进展。
PS：文章介绍了一个细胞外囊泡中的miRNA参与食管鳞状细胞癌放射耐受性调节。这是协和医学院的研究人员的最新研究成果。文章的逻辑比较严谨，数据比较详实，是经典的细胞外囊泡miRNA的研究报道，从事细胞外囊泡miRNA研究的朋友们可以学习和参考。更多内容请关注往期推文：北京协和医学院：外泌体miR-339-5p通过靶向Cdc25A影响局部晚期食管鳞状细胞癌的放疗敏感性
- Endoplasmic Reticulum Stress Promotes Liver Cancer Cells to Release Exosomal miR-23a-3p and Up-regulate PD-L1 Expression in Macrophages. 内质网应激促进肝癌细胞通过外泌体释放miR-23a-3p并上调巨噬细胞中PD-L1的表达。 [Hepatology] IF=14.079 PMID：30854665
摘要：内质网（ER）应激促进肿瘤细胞逃避免疫监视。但是，潜在的机制仍然未知。我们假设ER应激诱导肝细胞癌（HCC）细胞释放外泌体，通过调节程序性死亡配体1（PD-L1）在巨噬细胞上的表达来减弱抗肿瘤免疫。在这项研究中，我们证明了几种ER应激标记物的表达（葡萄糖调节蛋白78 [GRP78]，激活转录因子6 [ATF6]，PKR样内质网激酶[PERK]，肌醇需要酶1α[IRE1α]）在HCC组织中的上调，与HCC患者的总体生存率和临床病理学评分呈负相关。 ER应激相关蛋白的表达与HCC组织中CD68-阳性（CD68 +）巨噬细胞募集和PD-L1表达呈正相关。高通量测序分析将microRNA（miRNA / miR）-23a-3p鉴定为来自ER应激诱导剂衣霉素处理的HCC细胞（Exo-TM）的外泌体中最丰富的miRNA之一。 HCC组织中miR-23a-3p水平与总体存活率呈负相关。用Exo-TM处理在体外和体内上调巨噬细胞中PD-L1的表达。生物信息学分析表明miR-23a-3p通过磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN） - 磷酸肌醇-4,5-二磷酸3-激酶（PI3K） - 蛋白激酶B（AKT）途径调节PD-L1表达。通过体外转染和共培养实验证实了这一观点，其揭示了miR-23a-3p抑制PTEN表达并随后升高巨噬细胞中磷酸化的AKT和PD-L1表达。最后，T细胞与Exo-TM刺激的巨噬细胞的共培养降低了CD8 + T细胞比率和白细胞介素-2产生，体外增加了T细胞凋亡。因此我们认为，ER应激的HCC细胞释放外泌体，上调巨噬细胞中的PD-L1表达，随后通过外泌体miR-23a-PTEN-AKT途径抑制T细胞功能。我们的研究结果为肿瘤细胞如何逃避抗肿瘤免疫提供了新的见解。
PS：从细胞外囊泡的角度解释ER应激对肿瘤细胞微环境的作用，最终回归到对肿瘤行为和病人预后的影响。
- A Phytophthora Effector Suppresses Trans-Kingdom RNAi to Promote Disease Susceptibility. Phytophthora产生的抑制因子能够抑制跨物种RNAi以促进植物对疾病的易感性。 [Cell Host Microbe] IF=17.872 PMID：30595554
摘要：RNA沉默（RNAi）在植物的抗病原体免疫中具有公认的作用。破坏性真核病原体疫霉菌（Phytophthora）编码RNAi（PSR）的抑制因子，其能够增强植物对疾病的易感性。然而，小RNA在防御真核病原体中的作用尚不清楚。在这里，我们的研究表明，拟南芥的疫霉菌感染导致多种次级小干扰RNA（siRNA）的产生增加。这些siRNA并不是调节内源植物基因的，而是在植物来源的细胞外囊泡中被发现，并且可能在自然感染期间使疫霉中的靶基因沉默。在Phytophthora中引入植物siRNA导致发育缺陷并且消除了病原体的毒力，而次级siRNA生物发生缺陷的拟南芥突变体对Phytophthora是超敏感的。值得注意的是，疫霉菌效应物PSR2特异性地抑制拟南芥中的二次siRNA生物发生并促进感染。这些发现揭示了siRNA作为抗真核病原体的抗微生物剂的作用，并突出了以宿主和病原体之间的跨物种基因沉默为中心的防御/反防御“军备”竞赛。
PS：植物细胞也可以产生细胞外囊泡，这是近两年的研究进展。植物来源的细胞外囊泡通常在植物免疫反应过程中发挥着作用。这篇文章则阐释了病原体与植物宿主之间基于细胞外囊泡介导的跨物种siRNA干扰所展开的进化对决。
hzangs建立了qq实名交流群~
欢迎大家来这里聊聊天，交流交流课题。
为了保证群内部的交流信息的可靠性，避免软广告等可能影响大家科研思路的事件发生，该qq群采取实名制度。请实名入群。谢谢大家配合。
QQ群号：450453711 加群验证消息请注明 ：姓名+单位。
今天的整理就到这里。希望大家可以有所收获。大家下周见！
