尽管细胞外囊泡(EVs)在细胞间通讯中发挥作用，但它们的不同种群及其分泌机制尚未完全表征：EVs如何以及在何种程度上形成为内吞隔室腔内囊泡 (外泌体) 或在质膜 (PM) 上形成囊泡（ectosomes）仍不清楚。近日，Clotilde Théry研究组在Nature Communications杂志上发表文章，该研究跟踪了EV标志物CD9和CD63从内质网到它们的驻留区室，分别是PM和晚期内体的细胞内运输。在它们最终分离之前，观察到两个地方的瞬时共定位。CD9和稳定在PM的突变CD63在EV中比CD63更丰富地释放。因此，在HeLa细胞中，ectosomes比外泌体分泌更多。通过比较蛋白质组学分析和对内体pH中和的差异反应，确定了一些可能对外泌体 (LAMP1) 或ectosomes (BSG、SLC3A2) 具有特异性的表面蛋白。该研究工作为任何细胞类型中外泌体和小ectosomes的分子和功能区分开辟了道路。
所有细胞都会在它们的环境中释放膜包裹的囊泡，统称为细胞外囊泡 (EV)。这些EV包含一组选定的脂质、核酸和蛋白质，它们来自它们的起源细胞，因此可以将一系列复杂的信息传递给周围或远处的细胞。EVs可以通过从原核和真核细胞的质膜 (PM) 直接向外出芽而形成。在真核细胞中，EVs也可以首先作为内吞途径 (MVB) 的内部多泡隔室的腔内囊泡形成，然后在这些隔室与PM融合后分泌。为了区分命名，建议使用术语“外泌体”专门用于MVB衍生的EV，而不是所有小型EV。另一方面，PM衍生的EV被使用各种名称，例如微泡（microvesicles）、微粒（microparticles）或ectosomes：该研究使用后一个术语，该术语专门用于PM衍生的EV，而其他术语也用于任何EV的类型。由于它们在不同的亚细胞位点形成，因此外泌体和ectosomes可能包含不同的特定货物集，因此具有不同的功能。然而，鉴于在生物流体或细胞条件培养基中存在的相同大小的外泌体和ectosomes而难将它们区分开，缺乏区分外泌体和ectosomes的特异性蛋白质标记物或完全特异性的工具。在过去的二十年中，几种四跨膜蛋白，尤其是CD63、CD81和CD9已被用作外泌体的标志物，因为与全细胞裂解物相比，它们在小EV中的积累，以及CD63在MVB中的稳态积累。然而，最近已经观察到它们在其他EV中的存在。通过捕获特异携带CD63或CD9或CD81的EV，然后分析它们的蛋白质组成和内体标志物的富集，研究提出仅含有CD9或CD81而不含CD63的 EV 可能不会在内体中形成（因此是ectosomes） ，而那些携带CD63与一个或两个其他四跨膜蛋白的可能对应于内体衍生的外泌体。这一观察结果是使用原代人类免疫树突状细胞释放的EV进行的，这使得通过进行细胞生物学分析直接验证模型变得复杂。这项工作旨在确定含有不同四跨膜蛋白的EV的实际外泌体或ectosomes性质。使用HeLa细胞，这种细胞模型，适用于解决细胞生物学问题所需的实验操作。为了确定这些细胞释放的EV的亚细胞来源，需要以时间控制的方式跟踪四跨膜蛋白的细胞内运输，从它们在内质网(ER) 中的初始合成到它们在EV中的分泌。使CD63和CD9适用于RUSH系统，该系统已被用于跟踪和控制许多跨膜和分泌蛋白的运输，从而确定非典型的分泌途径。这也使我们能够同步释放含有CD9或CD63的EV，以确定新合成的EV的更均匀混合物的组成。 
研究结果表明，CD63和CD9都可以在质膜形成的小ectosomes中释放，并且在HeLa细胞中，外泌体代表小EVs(sEVs) 的一个小亚群，它们携带CD63和其他晚期内体分子，如LAMP1/2。它们的分泌特别容易受到内体pH值的中和。BSG和SLC3A2被鉴定为HeLa细胞中ectosomes分泌的特定标记物，相反对内体pH中和不敏感。有趣的是，CD81是另一种常用作外泌体和/或小EV标记物的四跨膜蛋白，其行为类似于CD9而不是CD63。此处确定的外泌体与ectosomes的特异性标志物和分子机制将为进一步研究以破译它们各自的功能铺平道路。MathieuM, Névo N, Jouve M, Valenzuela JI, Maurin M, Verweij FJ, Palmulli R, Lankar D,Dingli F, Loew D, Rubinstein E, Boncompain G, Perez F, Théry C. Specificitiesof exosome versus small ectosome secretion revealed by live intracellular tracking of CD63 and CD9. Nature Communications. 2021Jul 19;12(1):4389. PMID: 34282141.外泌体资讯网 Nat Commun：CD63才是外泌体特异性标志性蛋白，而CD9和CD81并不特异
