口腔鳞状细胞癌（OSCC）的淋巴结转移与预后不良有关，细胞外囊泡（EVs）内含丰富的生物学活性物质（如：蛋白质、DNA和RNA等），可以转移致癌分子来调节肿瘤的发生，为肿瘤性疾病的液体活检（如：唾液、血液、尿液等）提供重要靶点。然而，很少有研究探讨口腔癌颈清术后引流液在口腔癌转移中的作用，口腔癌颈清术后引流液分泌的细胞外囊泡（PDF-EVs,Profiling in Drainage Fluid- Extracellular Vesicle）在转移组口腔癌和非转移组口腔癌的蛋白质组学特征也尚未阐明。
基于此，来自武汉大学口腔医院口腔颌面-头颈肿瘤外科刘冰教授和卜琳琳副教授与陈刚教授合作研究团队，于2022年11月4日在国际著名杂志Journal of Dental Research（IF：8.9，牙科与口腔外科1区）上发表题为 “Preliminary Extracellular Vesicle Profiling in Drainage Fluid After Neck Dissection in OSCC”的文章 (2022 Nov 4:220345221130013)。武汉大学口腔医院肿瘤外科卜琳琳副教授、陈刚教授和刘冰教授为论文的共同通讯作者，硕士研究生王菁、肿瘤外科青年医师满其文博士和博士研究生傅秋云为论文共同第一作者。该文章通过PDF-EVs的分离和鉴定、蛋白组学技术、纳米流式细胞术和共聚焦显微镜等检测原理首次在口腔癌颈清术后引流液领域展开基础理论和应用前沿科学探索（图一）。
图1. PDF-EVs的分离和鉴定LC-MS/MS蛋白质组学分析了6个口腔癌患者（3 LN+ and 3 LN−）的PDF-EVs，总共筛选出2134个蛋白，其中有313个差异性蛋白，156个蛋白质在转移组口腔癌中上调和157个蛋白质在非转移组口腔癌下调。KEGG通路分析用于识别潜在的相关通路。基于前20个最显著的富集途径，大多数已鉴定的蛋白质与代谢通路相关（图二）。
图2.术后引流液来源的细胞外囊泡（PDF-EVs）的蛋白质组学特征根据PDF-EVs候选蛋白与代谢途径的关联，选择了EHD2+PDF-EVs和CAVIN1+PDF-EVs这两个蛋白进行纳米流式细胞术验证，发现EHD2+PDF-EVs和CAVIN1+PDF-EVs在转移组口腔癌中高表达，而EHD2+tissue-EVs、CAVIN1+tissue-EVs和EHD2+saliva-EVs、CAVIN1+saliva-EVs在转移组口腔癌和非转移组口腔癌中无明显差异 （图三）。该研究首次探索了转移性口腔癌患者颈清引流液相关蛋白，为了解它们在转移性和非转移性口腔癌中的作用提供了启示。
图3. 纳米流式细胞术分析口腔癌患者的细胞外囊泡中EHD2和CAVIN1的表达参考文献：Preliminary Extracellular Vesicle Profiling in Drainage Fluid After Neck Dissection in OSCC, J Dent Res. 2022 Nov 4;220345221130013. doi: 10.1177/00220345221130013.
