随着人们对细胞外泌体在生理过程和疾病发生发展中的作用机制及应用前景的广泛研究,科学家们开始从蛋白质组学、脂质组学、基因组学、生物化学等多个角度研究 EV ,从而揭示 EV 的功能和潜在作用。
这些更加深入的研究需要我们看得更细致,不仅对整个外泌体群体进行表征研究,更需要获得单颗粒的多维度参数。流式细胞术正是一种对单颗粒获取多参数的技术,可以同时对EV进行计数、粒径检测和表征分析,能够:
- 充分表征各种外泌体
- 准确量化,测量和识别EV亚群
- 获得稳定的高质量的数据
尽管流式细胞术是一种检测EV的强大技术,依然有很多局限性需要突破。比如更高的分辨率检测80nm以下的外泌体,更高的荧光灵敏度检测低丰度蛋白,更标准的质控确保检测结果的准确性,更优化的清洁步骤减少样本间的携带污染等。
贝克曼库尔特生命科学正式推出专为纳米级小颗粒研究设计的CytoFLEX家族新成员——CytoFLEX nano 纳米流式分析仪。它突破传统流式细胞术的检测极限,能够清晰分辨80nm以下外泌体。用卓越的灵敏度和分辨率,灵活的方案设计,可重复的结果和简单的操作,拓展外泌体的研究边界。
多色外泌体分群
CytoFLEX nano纳米流式分析仪配备405nm、488nm、561nm、638nm 4种激光,6个荧光通道,涵盖外泌体研究的主要染料,能够真正实现外泌体多色分群。
我们以从健康供体分离的PPP(贫血小板血浆)EV亚群研究为例,从结果可以看到CytoFLEX nano 能在不受背景噪声干扰的情况下,检测并区分单个PPP EV颗粒上的不止一个荧光信号,包括PB、FITC、PE、APC和PC7,甚至可以看到低表达的小阳性群体,如CD63四次穿膜蛋白和红细胞污染的CD235a。
侧向无染色分群
CytoFLEX nano具备5个侧向散射通道,通过不同通道的SSC散射光比值,无需使用染料,即可分离识别不同外泌体亚群。
我们用两种侧向散射光对市售的rEVs(SAE0193,Sigma-Aldrich)进行分析,可以清晰识别样品中两种不同尺寸的EV。
高灵敏度+高分辨率
CytoFLEX nano各个荧光通道中检测500nm八峰微球都有优异表现,不仅可以检测到低丰度外泌体,还可以清晰检测表面的低密度抗原。
在表征多种大小的颗粒时,CytoFLEX nano能够清晰分辨至少10nm粒径差异的类群。
严格质控保障
CytoFLEX nano对荧光灵敏度、Baseline等实施自动监控,确保排除仪器性能问题影响实验结果。
通过这种革新的流式细胞术,研究人员可以快速、准确、高通量地获取外泌体的数量、粒径和表征信息。研究人员能够解锁外泌体研究新方向,更快、更简单地推进外泌体功能和机制研究。
外泌体资讯网 流式细胞术如何拓展外泌体研究边界