作者：土豆
对于目前外泌体提取的方法学研究一直是外泌体研究的一个重点。想要获得纯度更高的外泌体，又想最简单的提取外泌体，是外泌体提取方法改进的难点。在之前的推送中给大家曾经统计过Nature、Cell、Science这些耀眼杂志中外泌体提取方法的统计。（详细阅读请移步【套路】耀眼的文章都用什么方法分离外泌体！）
外泌体研究界最家喻户晓的就是大牛Thery C了，想当年一篇外泌体超速离心提取方法的文章已经是成为了众多外泌体研究者的“圣经”了（Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids，2006）。据不完全统计，大牛Thery C实验室已发表外泌体相关paper四五十篇，其中大多数为综述性文章，实验性文章有约12篇，我们有必要对它们近几年的paper“窥探”一下，看看大牛实验室是如何提取外泌体的，嘿嘿。
- Qualitative differences in T-cell activation by dendritic cell-derived extracellular vesicle subtypes. 树突状细胞衍生的细胞外囊泡亚型在T细胞活化中的差异。EMBO J. 2017.
本文章提取的是DC来源的外泌体，核心步骤100000g×90min。
- Proteomic comparison defines novel markers to characterize heterogeneous populations of extracellular vesicle subtypes. 蛋白质组学比较表征了细胞外囊泡亚群标记的异质性。Proc Natl Acad Sci U S A. 2016.
研究的细胞包括DC、HEK293T、RPE-1、HeLa-CIITA、MDA-MB-231、SHIN、IGROV-1、OV2008，核心步骤100000g×90min超速离心。细胞用去外泌体血清培养，100000g离心过夜。
- Different immunogenicity but similar antitumor efficacy of two DNA vaccines coding for an antigen secreted in different membrane vesicle-associated forms. 以不同的囊泡形式分泌的两种编码抗原的DNA疫苗，免疫原性不同但具有相似的抗肿瘤功效。 J Extracell Vesicles. 2014.
研究的细胞类型主要是表达了OVA（卵清蛋白）的肿瘤细胞MCA、B16F10、EL4等。提取方法先用100000g离心75min，然后200000g离心90min，获取到的是100nm以下的外泌体。
- Analysis of ESCRT functions in exosome biogenesis, composition and secretion highlights the heterogeneity of extracellular vesicles. 外泌体生物发生、组成和分泌中的ESCRT功能分析突出了胞外囊泡的异质性。J Cell Sci. 2013.
提取细胞系为HeLa-CIITA OVA，离心条件依旧是100000g×90min。
- Rab27a supports exosome-dependent and -independent mechanisms that modify the tumor microenvironment and can promote tumor progression. Rab27a相关的外泌体依赖性和非依赖性机制修饰肿瘤微环境并可促进肿瘤进展。Cancer Res. 2012.
4T1细胞系，离心方法是参考文献17，也就是2006年paper的超速离心方法。
- Diverse subpopulations of vesicles secreted by different intracellular mechanisms are present in exosome preparations obtained by differential ultracentrifugation. 通过差异超速离心获得的外泌体中存在由不同细胞分泌囊泡的不同亚群。J Extracell Vesicles. 2012
4T1细胞系，核心步骤是100000g×90min。
- Rab27a and Rab27b control different steps of the exosome secretion pathway. Rab27a和Rab27b控制外泌体分泌途径的不同步骤。Nat Cell Biol. 2010.
细胞系为HeLa-CIITA，同样是2006年的超速离心方法。检测外泌体是用的抗CD63的抗体进行流式检测。
最后附上thery阿姨的官网介绍：
外泌体资讯网 大牛Thery C实验室如何提取外泌体？
